天麻栽培菌种制作技术是天麻人工栽培的核心环节，其质量直接关系到天麻的产量与品质，天麻为异养植物，自身无法通过光合作用制造养分，必须依靠共生真菌（主要为蜜环菌）提供营养，优质菌种的制备是天麻成功栽培的基础，以下从菌种类型、制备材料、工艺流程、质量控制及注意事项等方面详细介绍天麻栽培菌种的制作技术。
天麻栽培菌种的主要类型
天麻栽培涉及两类关键菌种：萌发菌和蜜环菌。
- 萌发菌：主要用于天麻种子萌发，为种子提供初期营养，常见类型为紫萁小菇（Mycena osmundicola）等，属于兰科植物种子萌发共生真菌。
- 蜜环菌：是天麻生长过程中长期共生的营养菌，负责为天麻块茎提供生长发育所需的碳水化合物，常见类型为发光蜜环菌（Armillaria mellea），两类菌种需协同作用,才能完成天麻从种子到块茎的完整生命周期。
制备材料与设备
（一）主要材料
- 萌发菌菌种材料：紫萁小菇斜面菌种、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）、天麻成熟种子（需经过层积处理打破休眠）。
- 蜜环菌菌种材料：优质蜜环菌斜面菌种、固体培养基（如木屑、麦麸、玉米芯等）、液体培养基（用于液体菌种制备）。
- 栽培材料：硬杂木（如柞树、桦树、青冈树等，直径2-10cm的树枝或木段）、树皮、砂质壤土（pH值5.5-6.5，透气保水）。
（二）主要设备
高压灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、接种工具（接种针、接种环、酒精灯）、培养容器（试管、菌袋、培养瓶）、温度计、湿度计、无菌操作箱等。
菌种制备详细工艺流程
（一）萌发菌菌种制作
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母种扩繁
（1）培养基制备：称取马铃薯200g（煮汁，过滤取清液）、葡萄糖20g、琼脂18g、水1000mL，混合后加热至琼脂完全溶解，分装至试管（每管装量1/4），塞上棉塞，高压灭菌（121℃，30分钟）。
（2）接种培养：在超净工作台中将紫萁小菇斜面菌种接种至PDA试管培养基中，25℃恒温避光培养7-10天，直至菌丝长满斜面。
（3）质量检查：选取菌丝洁白、浓密、无杂菌的母种，4℃保存备用,使用期不超过1个月。 -
原种与栽培种制备
（1）固体培养基配方：木屑70%、麦麸20%、葡萄糖8%、石膏粉1%、碳酸钙1%，含水量60%（以手握成团、指缝无水滴为宜）。
（2）装瓶灭菌：将混合均匀的培养基装入750mL菌瓶（装至瓶肩，中央打孔），高压灭菌（121℃，1.5小时），冷却至室温。
（3）接种培养：在无菌条件下，挑取黄豆大小的母种接入菌瓶培养基中，每支母种可接5-8瓶瓶，25℃培养20-25天，菌丝长满瓶后即可作为原种；原种再按相同方法扩繁至栽培种（菌袋培养）,培养周期约30天。
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（二）蜜环菌菌种制作
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母种扩繁
（1）培养基配方：PDA培养基（同萌发菌）或松针培养基（松针煮汁200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂18g/L）。
（2）接种与培养：将蜜环菌斜面菌种接种至培养基，20-25℃培养10-15天，蜜环菌菌丝呈白色至淡黄色，在培养基表面可形成棕红色的菌索。 -
原种与栽培种制备
（1）固体培养基配方：- 配方一（木屑型）：木屑60%、玉米芯20%、麦麸15%、葡萄糖3%、石膏粉1%、碳酸钙1%；
- 配方二（枝条型）：硬杂木枝条（直径1-2cm，截成3cm小段）70%、木屑20%、麦麸8%、石膏粉2%。
（2）装瓶灭菌：配方一装入菌瓶，配方二先将枝条装入瓶底，再填入木屑和麦麸混合物，高压灭菌（121℃，1.5小时）。
（3）接种培养：母种接种后，22-25℃培养，15-20天菌丝长满瓶，继续培养10天，待菌索形成即可使用。
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液体菌种制备（可选）
（1）培养基配方：葡萄糖20g/L、蛋白胨5g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁0.5g/L，pH值6.0-6.5。
（2）发酵培养：将培养基装入发酵罐，121℃灭菌30分钟，冷却后按10%接种量接入蜜环菌母种，25℃、120r/min振荡培养5-7天，菌体浓度达10⁸个/mL时即可用于接种栽培材料。
菌种质量标准与控制
（一）萌发菌质量标准
- 母种：菌丝洁白、致密，无杂菌污染，镜检可见锁状联合。
- 原种/栽培种：菌丝满瓶，表面有少量菌索，无异味、无杂菌（如绿霉、木霉）。
（二）蜜环菌质量标准
- 母种：菌丝白色，气生菌丝少，培养基表面有棕红色菌索。
- 原种/栽培种：菌丝长满培养料，菌索发达、呈棕红色，有荧光（夜间可见），无杂菌污染。
（三）质量控制关键点
- 无菌操作：接种全程在超净工作台或无菌箱中进行，工具需75%酒精消毒，操作人员严格洗手消毒。
- 温度控制：萌发菌最适温度25℃，蜜环菌22-25℃，避免温度超过30℃导致菌丝老化或死亡。
- 杂菌防治：培养基灭菌要彻底，接种环境定期消毒；发现杂菌污染及时剔除，污染料需灭菌处理后丢弃。
菌种保藏与使用
- 菌种保藏：母种用石蜡封口后4℃保存，每6个月转接一次；原种/栽培种阴凉干燥处保存，使用期不超过3个月。
- 菌种使用：
- 萌发菌：用于拌种或撒播于天麻种子表面，用量为每100粒种子接种1瓶原种。
- 蜜环菌：用于培养菌床，将菌枝与菌种一起埋入栽培坑，每平方米用量3-5瓶原种或2-3袋栽培种。
常见问题与注意事项
- 菌丝生长缓慢：原因包括温度过低、培养基含水量不足、灭菌不彻底等，需控制温度在25℃左右，调整培养基含水量至60%，确保灭菌彻底。
- 菌索形成少：蜜环菌菌索形成不足可能与氧气不足或光照过强有关，需保持培养环境通风良好，避免直射光。
- 避免使用陈旧菌种：超过保存期的菌种活力下降，易导致天麻减产，建议每年更新菌种。
相关问答FAQs
问题1：天麻萌发菌和蜜环菌可以混合制备成复合菌种吗？
解答：不建议直接混合制备复合菌种，萌发菌（紫萁小菇）和蜜环菌的生态位和营养需求不同，混合培养易导致竞争生长，影响菌种活性，正确做法是先利用萌发菌促进天麻种子萌发，形成原生块茎后，再接种蜜环菌提供营养，分阶段满足天麻生长需求。
问题2：如何判断蜜环菌菌种是否优质？
解答：优质蜜环菌菌种需满足以下条件：①菌丝浓白、健壮，气生菌丝少；②培养基表面或内部有大量棕红色、发光的菌索（夜间更明显）；③菌种无异味、无杂菌污染（如绿霉、黑霉）；④菌龄适中（一般30-40天），过长则菌索老化，活力下降，使用前可进行小试接种,观察其在木段上的定殖速度和菌索生长情况。
